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細(xì)胞培養(yǎng)瓶中出現(xiàn)了污染的原因排查
發(fā)表日期:2022-08-08

我們?cè)诎l(fā)現(xiàn)細(xì)胞培養(yǎng)瓶中出現(xiàn)了污染的原因排查一般都是采用單一變量法,先把每種試劑:基礎(chǔ)培養(yǎng)基、FBS、PBS、完全培養(yǎng)基、不加雙抗的完全培養(yǎng)基和凍存液吸取少量到6孔板,放在培養(yǎng)箱過夜/2天(因?yàn)?℃冰箱溫度低不利于細(xì)菌的生長(zhǎng),拿來(lái)涂片不易找得到。如果肉眼和顯微鏡看不到細(xì)菌污染也不能排除污染,因?yàn)榧?xì)菌會(huì)依附在細(xì)胞上,空培沒有細(xì)胞,細(xì)菌又很小很難看到,所以最長(zhǎng)可放置7天,若7天后還沒有污染跡象就可以排除!)。

細(xì)胞培養(yǎng)瓶中出現(xiàn)了污染的原因排查_富道細(xì)胞

之后進(jìn)行離心:12000rpm、1min,棄去上清留下少許液體重懸沉淀后涂片、風(fēng)干后滴加結(jié)晶紫染液1min后用少量慢速清水在上面沖洗3次(不要對(duì)著涂片的位置沖!),在吸水紙3個(gè)不同位置各壓干一次后滴一滴香柏油到載玻片后在油鏡下觀察有無(wú)細(xì)菌。鏡下形態(tài)規(guī)則、兩頭染色深中間染色淺的長(zhǎng)桿狀是桿菌;形態(tài)是正圓光滑的球狀、整個(gè)球形染色深的是球菌(大小都不是很大的),其它形態(tài)不規(guī)則、過大/過小、一大片的可能只是雜質(zhì)和細(xì)胞膜碎片等等。此方法即為革蘭氏染色法,是最常用的細(xì)菌染色法,結(jié)晶紫也可稱之為龍膽紫,是堿性染料。當(dāng)它溶解后,可以被活細(xì)胞攝入,同時(shí)可以使DNA、蛋白質(zhì)、脂肪著色。染色顯示細(xì)胞核(與核酸結(jié)合)呈藍(lán)色,細(xì)胞質(zhì)呈粉紅色。肉眼顯示整個(gè)細(xì)胞呈深藍(lán)色。

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